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當前位置:水產資料 → 論文解讀--創傷弧菌感 今天是:2019年08月29日 星期四

論文解讀--創傷弧菌感染基因改良羅非魚病理學研究

出處:水生動物健康評估公眾號 作者:吳凡 水產養殖網 2019-07-22 11:36:00

  今天和大家分享一篇來自Aquaculture的文章:創傷弧菌感染印度浮式網箱養殖的基因改良羅非魚病理學研究,文章引用信息如下:
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  據報道,在印度喀拉拉邦高知縣海水漂浮網箱養殖的基因改良羅非魚亞成體中爆發了皮膚潰瘍病。研究者將來自不同病魚的各種組織(血液,腎臟,肝臟,脾臟和腦)進行細菌分離以得到致病菌。根據常規微生物學方法和分子生物學方法,鑒定為創傷弧菌。另外,分離株中存在對魚類毒力特異的創傷弧菌標記物。通過感染試驗證實了創傷弧菌的致病性。基于pilF多態性的PCR和vvhA基因序列表明本實驗分離的創傷弧菌對人類具有潛在危險。該菌株可在健康魚血清中快速繁殖。在較高溫度下,病原體的血清存活率顯著增加(p≤0.05);這可以解釋創傷弧菌在高溫下感染能力的增加。
  
結果如下:

發病的羅非魚
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  病魚皮膚顏色變深,鰭上的外部出血,眼睛角膜混濁,下腹部和下頜部區域發紅,鰓蒼白。腹腔內全身脂肪堆積,血管充血,蒼白肝臟,胃內粘膜充血,充滿黃色透明凝膠狀液體,充滿膽囊,腎臟和脾充血腫大。

創傷弧菌毒力株特異性毒力標記物PCR擴增
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  基于常規微生物學方法和物種特異性引物PCR,將感染性細菌鑒定為創傷弧菌。

組織病理學檢測
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  圖a 肝實質血管充血; 圖b 膽管上皮出現肥大性變化; 圖c 紅細胞替代壞死的肝細胞; 圖d 脾實質中含鐵血紅素增加

感染實驗
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  在實驗感染期間觀察到的肉眼可見的損傷。圖a:腹水; 圖b:皮膚上出現瘀點; 圖c:鰭底部出血; 圖d:尾鰭出血。

LD50的測定
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 在不同劑量的創傷弧菌感染羅非魚幼魚,圖為感染后羅非魚累積死亡率%(CMR)。圖a:為浸泡式感染后的CMR%;圖b為注射感染后的CMR%。

基于16S rRNA基因序列的系統發育分析
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  基于16S rRNA基因序列系統進化樹分析顯示分離菌株是創傷弧菌,命名為Vibrio vulnificus CMFRI/VV-02。

血清中細菌存活
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  25℃、28℃、31℃,CMFRI/VV-02菌株在羅非魚血清中孵育4小時,PBS中作為對照,顯示31℃時血清中菌株存活率在統計學上顯著更高(p≤0.05)。

vvhA基因序列分析
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基于vvhA基因序列系統發育進化樹,顯示CMFRI/VV-02菌株屬于創傷弧菌Group I組。

基于pilF多態性的PCR
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PCR擴增pilF基因片段,獲得~338bp的預期擴增子。

抗生素敏感性試驗
  利用9種不同類別的23種抗生素進行分離菌株的抗生素敏感性試驗,結果顯示CMFRI/VV02菌株僅對3種抗生素即頭孢西丁(CK30),粘菌素(CL10)和頭孢呋辛(CXM30)具有抗性或中度抗性。

總結:
  本文首次描述了印度羅非魚網箱養殖中創傷弧菌爆發的病理特征。羅非魚的快速生長以及高放養密度和高水溫可能是爆發的原因。基于pilF多態性的PCR和CMFRI/VV-02株的vvhA基因序列表明,感染的羅非魚可能造成公共健康危害,魚類養殖者應在弧菌病爆發期間采取適當的預防措施和管理措施,包括降低養殖密度,迅速清除垂死的魚,改變養殖籠的內部結構及其位置,并進行遮蔭處理。同時,在未來的研究中,建議進一步研究網箱養殖場中創傷弧菌的流行和種群結構以及開發適當的預防性管理措施,包括有效的疫苗或拮抗和免疫刺激飼料。


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